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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NIST SRM 2372a - 人類 DNA定量 旨在用于人類基因組脫氧核糖核酸 (DNA) 定量材料的價(jià)值分配,，主要用于定量聚合酶鏈反應(yīng) (qPCR)。

一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NIST SRM 2372a 單元由三種在 pH 8.0 水性緩沖液中充分表征的人類基因組 DNA 材料組成,。這些成分來(lái)自人類血沉棕黃層樣本并標(biāo)記為 A,、B 和 C。成分 A 由來(lái)自單個(gè)男性供體的基因組 DNA 組成,。組分 B 由來(lái)自單個(gè)女性供體的基因組 DNA 組成,。組分 C 由基因組 DNA 的重量混合物組成（1 份男性供體對(duì) 3 份女性供體）。一個(gè) SRM 單元由一個(gè)裝有每種成分的 0.5 mL 無(wú)菌小瓶組成,，每個(gè)小瓶中含有大約 55 μL 的 DNA 溶液,。這些小瓶中的每一個(gè)都貼有標(biāo)簽，并用顏色編碼的螺帽密封,。

認(rèn)證值： 

認(rèn)證值在表 1 中提供,。這些認(rèn)證值是根據(jù)液滴數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng) (ddPCR) 對(duì)八條染色體上十個(gè)獨(dú)特目標(biāo)的測(cè)定計(jì)數(shù)、稀釋因子和液滴體積測(cè)量值確定的,。 NIST 認(rèn)證值是 NIST 對(duì)所有已知或可疑的偏差來(lái)源都已考慮在內(nèi)的最高置信度的值,。

表 1. SRM 2372a(a) 數(shù)量和質(zhì)量濃度的認(rèn)證值 拷貝數(shù)值在計(jì)量上可追溯到自然單位計(jì)數(shù) 1 和比率 1 以及國(guó)際單位制 (SI) 導(dǎo)出的體積單位。 DNA 質(zhì)量濃度值在計(jì)量學(xué)上可追溯到自然單位計(jì)數(shù)和比率 1 以及 SI 導(dǎo)出的質(zhì)量和體積單位,。

(a) 值表示為 x ± U95%(x),，其中 x 是認(rèn)證值，U95%(x) 是認(rèn)證值的擴(kuò)展不確定度,。分析物的真實(shí)值被認(rèn)為位于區(qū)間 x 內(nèi) ± U95%(x)，置信度為 95%,。 要傳播這種不確定性,，請(qǐng)將認(rèn)證值視為具有平均值 x 和標(biāo)準(zhǔn)偏差 U95%(x)/2 的正態(tài)分布隨機(jī)變量。

(b) 拷貝數(shù)濃度值,、每納升人類單倍體基因組當(dāng)量 (HHGE) 是基于八條染色體上十個(gè)獨(dú)特目標(biāo)的液滴數(shù)字 (ddPCR) 分析計(jì)數(shù),、稀釋因子和液滴體積測(cè)量值。

(c) 質(zhì)量濃度值,，即每微升人類基因組 DNA 的納克數(shù),，是根據(jù)數(shù)量濃度結(jié)果、參考 HHGE 中核苷酸堿基對(duì) (bp) 的數(shù)量以及核苷酸單體鈉鹽的平均分子量計(jì)算得出的 包含 DNA 聚合物,。

非認(rèn)證值：

表 2 列出了 SRM 2372a 組件中線粒體基因組 (mtDNA) 數(shù)量相對(duì)于核單倍體基因組 (nDNA) 數(shù)量的值,。 由于它們基于數(shù)量有限的獨(dú)立 ddPCR 檢測(cè)，因此這些值不符合 NIST 的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn),，但卻是目前可用的最佳估計(jì)值,。

儲(chǔ)存和處理：

在需要使用之前,，標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì) NIST SRM 2372a 應(yīng)儲(chǔ)存在 2 °C 至 8 °C 之間的黑暗中。在取出樣品等分試樣進(jìn)行分析之前,，組分小瓶應(yīng)簡(jiǎn)單混合并離心（不打開(kāi)小瓶蓋）,。為使認(rèn)證值適用，打開(kāi)小瓶后應(yīng)立即取出材料并立即處理,。認(rèn)證值不適用于重新封蓋的小瓶中剩余的任何材料,。該認(rèn)證僅適用于初次使用，如果以后使用剩余材料,，則不能保證相同的結(jié)果,。

用途：

對(duì)于 qPCR 分析，根據(jù)認(rèn)證的質(zhì)量濃度分配二級(jí)標(biāo)準(zhǔn) DNA 溶液的值,。使用由 SRM 2372a 組件制備的一個(gè)或多個(gè)稀釋系列,，將檢測(cè)校準(zhǔn)到 SRM 2372a。對(duì)于非性別特異性 qPCR 檢測(cè),，所有三種成分都應(yīng)用作校準(zhǔn)物,，以闡明潛在的材料檢測(cè)特異性相互作用。用戶應(yīng)記住存在移液錯(cuò)誤的可能性,；因此,，在制備校準(zhǔn)溶液時(shí)應(yīng)適當(dāng)小心。

安全性：

用于制備本產(chǎn)品的每個(gè)供體單位都經(jīng)過(guò) FDA 許可的測(cè)試,，發(fā)現(xiàn)人類免疫缺陷病毒（HIV-1 RNA 和抗 HIV 1/2）,、乙型肝炎（HBV DNA 和 HBsAg）呈陰性、丙型肝炎(HCV RNA和抗HCV),、西尼羅河病毒(WNV RNA)和梅毒,。此外，根據(jù) FDA 對(duì)克氏錐蟲(chóng)（南美錐蟲(chóng)）的指導(dǎo)方針對(duì)每個(gè)捐贈(zèng)者進(jìn)行了測(cè)試,，發(fā)現(xiàn)它們呈陰性/無(wú)反應(yīng),。然而，沒(méi)有已知的測(cè)試方法可以完全保證這種材料中不存在傳染性病原體,。因此,，這種基于人類血液的產(chǎn)品應(yīng)按照生物安全級(jí)別 1 進(jìn)行處理。SRM 2372a 組件和衍生溶液應(yīng)按照當(dāng)?shù)?、州和?lián)邦法規(guī)進(jìn)行處理,。

來(lái)源：

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NIST SRM 2372a 是在 NIST 進(jìn)行適當(dāng)?shù)娜祟愂茉囌哐芯看_定后開(kāi)發(fā)的。