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主要用途：

 SRM 998  血管緊張素I  標(biāo)準(zhǔn)品主要用于腎素測(cè)定的校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)化,，以及作為氨基酸分析和高效液相色譜法(HPLC)的參考肽。

規(guī)格：

SRM 998的一個(gè)單位由0.5 mg化學(xué)合成的血管緊張素Ⅰ組成,。

經(jīng)認(rèn)證的血管緊張素Ⅰ純度值通過HPLC進(jìn)行評(píng)估,，并通過核磁共振(NMR)在報(bào)告的不確定性范圍內(nèi)間接確認(rèn)。在HPLC程序中,，肽含量通過標(biāo)準(zhǔn)添加法測(cè)量,，使用溶解在1 mol/LKOH 中的苯丙氨酸作為添加標(biāo)準(zhǔn)。SRM溶液和添加的標(biāo)準(zhǔn)溶液在6 mol/LHCl中水解并測(cè)定氨基酸組成,。苯丙氨酸濃度通過絕對(duì)重量和通過測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度并使用表觀比摩爾吸光度209±0.2L/gcm 計(jì)算濃度來確定,。苯丙氨酸與四種氨基酸（緬氨酸、亮氨酸,、組氨酸和精氨酸）中每一種的濃度比用于計(jì)算每個(gè)樣品中總肽的量,。所有報(bào)告的不確定度均表示為所列值的正負(fù)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)誤差。參考醋酸鹽含量值由單—方法確定,。

操作,、儲(chǔ)存

 SRM 998  血管緊張素I  標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)存放在-20°C的密封玻璃安瓿中，在打開前應(yīng)允許加熱到房間溫度,。

來源,、準(zhǔn)備和分析

該材料是從貝克曼儀器公司，生物產(chǎn)品業(yè)務(wù)(帕洛阿爾托,，加利福尼亞州),。

使用在 5000 kPa 壓力下操作的 25 cm x0.4 cm 十八烷基硅烷柱對(duì)溶解的 25 ug 該 SRM 998  血管緊張素I  標(biāo)準(zhǔn)品樣品進(jìn)行液相色譜分析。樣品已溶解在 8l 體積份 0.l molL 三乙胺磷酸鹽緩沖液（pH 3.5）和 19 體積份乙腈溶液中,。使用了兩種溶液：一種是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液,；另一種是用于溶解 SRM 的溶液。另一種是75體積份緩沖液與25體積份乙腈的溶液,。通過在 215 nm 和 280 nm 處測(cè)量吸光度來監(jiān)測(cè)洗脫,。在 81:19 的洗脫液比下，在 2l5 nm 處檢測(cè)到保留時(shí)間分別為 16.6 minutcs 和 12.2 min 的主峰和次峰,，在 280 nm 處僅檢測(cè)到主峰,。每個(gè)峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)為收集,，在 6 molL HCl 中水解并分析氨基酸組成。主峰的氨基酸含量表明它是血管緊張素 I,。次峰（<1% 的 215 nm 吸光度）不含可檢測(cè)到的肽材料,。在這些 HPLC 條件下，乙酸鹽聚集在溶劑前沿并且無法定量,。在 75:25 的洗脫液比例下,，在該波長處未檢測(cè)到額外的峰，表明不存在非肽,、UV 吸收材料,。

用4 0 0 MHz核磁共振波譜儀在脈沖傅里葉變換模式下測(cè)定了6種SRM樣品的乙酸含量。用整個(gè)樣品(約0.5mg)在0.5mL氧化氘(100原子%D)中溶解,，制備了分析溶液,。在Cach溶液中加入少量的鈉-4，4-二甲基-4-硅戊酸酯2,，2,，3，3-DS作為內(nèi)參,。由于在8.1.922處發(fā)現(xiàn)乙酸甲酯質(zhì)子信號(hào)與血管緊張素l的質(zhì)子信號(hào)重疊,，因此血管緊張素Ⅰ的一種乙酰丙酮法初步準(zhǔn)備用于確定乙酸酯峰下信號(hào)的準(zhǔn)確質(zhì)子計(jì)數(shù)。用0.02 mol HCl對(duì)該樣品進(jìn)行了兩次凍干處理,，結(jié)果表明,，該樣品不含乙酸酯，其光譜感興趣區(qū)為3個(gè),。在此基礎(chǔ)上,，對(duì)THC SRM樣品進(jìn)行了不凍干分析，從縮醛甲基峰及其信號(hào)的總積分中減去三個(gè)質(zhì)子的適當(dāng)積分值,，得到乙酸峰的積分,。三個(gè)質(zhì)子積分的適當(dāng)值是通過在高能量區(qū)總共29個(gè)質(zhì)子信號(hào)的積分平均值確定的，其中包括許多源自血管緊張素l的甲基,、甲基和甲基質(zhì)子的質(zhì)子信號(hào),。質(zhì)子信號(hào)的數(shù)字積分用圖表紙繪制，并進(jìn)行了處理,。使用下列儀器參數(shù)：數(shù)據(jù)集的大小,，16384點(diǎn)；4 US(30°翻轉(zhuǎn)角),；光譜寬度,，4 kHz，掃描次數(shù)，2000年,；弛豫延遲,，1.95秒。